引言：

2016年8月6日，由北京美儿脊髓性肌萎缩症关爱中心联合罕见病发展中心（CORD）等单位主办的第一届中国SMA大会在北京成功举办。北京协和医学院的黄尚志教授就SMA产前诊断方面进行了发言。在此，我们把黄教授的发言编辑整理，与大家分享。

会上黄教授首先向大家简要的介绍什么是SMA、SMA有哪些类型、SMA的病因在哪里等基本问题。黄教授解释到SMA是由运动神经元存活基因1（survivalmotor neuron gene 1,SMN1）功能丧失引起的，SMN位于5ql3，有两个反向重复的拷贝，即SMN1（SMNt）和SMN2(SMNc)，其中有8个核苷酸差别。

➤SMA基因突变类型：

● 90%-98%的患者是由于SMN1基因的外显子7纯合缺失（部分还累及外显子8）——SMN1与SMN2发生转换（conversion）

● 除此之外，还有：错义突变，位于SMN1基因密码子262至279之间；微小缺失和重复。

➤SMN基因的功能差别：

● SMN1：20-kb,cDNA1.7kb,多肽294aa；

● 两种SMN基因都可能产生1.7kb的全长转录本，但二者都有选择性剪接，产生小片段的异形体（SMNΔ5和SMNΔ7）。

而根据发病年龄和症状轻重程度，SMA在临床上可以分为多种类型：

● SMA 0（建议新增），产前即患病，严重的关节挛缩、双侧面瘫和呼吸障碍；

● SMAⅠ，生后6个月前发病；

● SMAⅡ，生后6-12个月发病；

● SMAⅢ，12个月之后的儿童期；

● SMAⅣ，成年发病。

SMA的临床诊断

SMA基因诊断方法沿革：PCR-SSCP、PCR/RFLP、Real-time PCR、PCR-DHPLC、AS-PCR、MLPA、Sanger 测序。

比如缺失型SMA诊断—PCR/RFLP的检测，黄教授认为这个问题的难点是酶切不彻底，并且他坦言在酶切不彻底的问题上还曾引发一个医疗纠纷，正因如此，使得他放弃了这种方法，以杜绝这样的事件再次发生。

而在SMN1和SMN2基因定量分析上，他指出独立双重PCR扩增SMN1和SMN2，设立内参照。这是一个线索，不用DHPLC，也可以进行检测。可以从KRIT1这里进行计算，那时候黄教授就想一定有一个办法计算出SMN1和SMN2的拷贝数，所以后来他又换了一种方法。

同时他强调到检测方法是需要改进的，比如优缺点上，Real-time Pcr，定量，仪器设备有要求，一定要有更多的改进，才能够使得它进行定量分析。而MLPA定量比较好，步骤复杂，需要自动分析仪。AS-PCR DHPLC可以定量，但过程比较复杂，仪器昂贵。所有技术的共同点除了SSCP以外，都是AS-PCR。

在脊髓萎缩症产前基因诊断方面，他指出几个要点：产前诊断的几个要点需要预分析，做到心中有数；产前诊断只针对检测先证者所具有的基因缺陷，不可能对其他可能发生的异常进行检测；产前诊断的风险已由临床医师告知。委托进行产前诊断是孕妇的知情选择；实验室接受医师的委托，仅对实验结果的真实性负责；以上结果仅供临床医师参考，由临床医师提供遗传咨询。

黄教授表示产前诊断需要保证取材或检测时没有错误，有时候错误就是发生在最基础的步骤上，就是材料的准备。他们用21号染色体的两个标题做样品的跟踪，以保证质量。

他说到产前诊断和临床诊断不同，临床诊断或许难免出点错，因为SMA到目前为止还没有做到治疗的，如果产前诊断出问题了，影响就非常大，所以做产前诊断的机构要比一般的临检要认真得多。21号染色体标记显示了样体有某些污染，这是挑选的不好。其他的诊断上是不是有这样的问题也需要考虑，一定要有多带性的分析来把关，保证质量。

➤SMA检测策略:

● AS-PCR半定量分析（PAGE），用于：临床病例纯合缺失型SMN1检测以及人群中SMN1缺失型杂合子的初筛。

● AS-PCR定量分析（荧光标记引物，自动测序仪分析），用于产前诊断和杂合子确诊。

● 非缺失型突变基因检测：SMN1特异引物RT-PCR测序，AS-PCR检测突变SMN1基因，进行产前诊断。

黄教授解释说杂合子筛查较早开始做，最早做的是用酶切的方法，国际资料1/40-1/50。国内资料是1/40，台湾的资料是1/30。将来就算有治疗的手段，但是费用也一定不会低。杂合子和其他的临床病结合起来，从临床经济学上是得到支持的。

 最后，黄教授指出几点提醒：

1. 正常个体的SMN1基因拷贝数：20/834（2.4%）健康染色体具有2个SMN1基因拷贝定量分析的确定缺失型杂合子的敏感性只有95.2%；如果依靠SMN1基因开倍数的定量分析，4.8%杂合子将被判断为“正常个体”。

2.1.7%的SMA突变为非缺失型，这样就有3.4%的复合杂合子患者因不是纯合缺失而不能被确定；

3. 这样依靠SMN1基因定量进行检测的敏感性就降到93.5%。